色譜柱的使用和維護(hù)注意事項

色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要，稍有不慎就會降低柱效，縮短使用壽命甚至損壞.在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護(hù)色譜柱． 

①避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動．溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內(nèi)的填充狀況；柱壓突然升高或降低也會沖動柱內(nèi)填料，因此在調(diào)節(jié)流速時應(yīng)該緩慢進(jìn)行，在閥進(jìn)樣時的轉(zhuǎn)動不能過緩。

②應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成，特別是反相色譜中，不應(yīng)直接從有機溶劑改變?yōu)槿渴撬粗嗳唬?nbsp;

③一般說來色譜柱不能反沖，只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去柱內(nèi)的雜質(zhì)．否則反沖會迅速降低柱效． 

④選擇使用適宜的流動相（尤其是pH），以避免固定相被破壞．有時可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱，分析柱是鍵合硅膠，預(yù)柱為硅膠，可使流動相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠＂飽和＂，避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解．

⑤避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注入柱骨需要對樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一保護(hù)柱．保護(hù)柱一般是填有固定相的短柱．保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換． 

⑥經(jīng)常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)，在進(jìn)行清洗時，對流路系統(tǒng)中流動相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右，即常規(guī)分析需要50-75ｍl。 

⑦保存色譜柱時應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長時間。 

⑧色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞，這時應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗；另一種可能是大分子進(jìn)入柱內(nèi)，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現(xiàn)塌陷，死體積增大。 

     通常色譜柱壽命在正確使用時可達(dá)2年以上。以硅膠為基質(zhì)的填料，只能在pH2~9范圍內(nèi)使用。柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強的物質(zhì)保留于柱頂。新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降。 每次工作完后，用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當(dāng)采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應(yīng)用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素（氟、氯、溴）的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經(jīng)常使用，應(yīng)每隔4~5天開機沖洗15分鐘。

9.色譜柱的保養(yǎng)：當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時，閥件或管路一定要清洗干凈； 要注意流動相的脫氣； 

避免使用高粘度的溶劑作為流動相； 進(jìn)樣樣品要提純； 嚴(yán)格控制進(jìn)樣量； 

每天分析工作結(jié)束后，要清洗進(jìn)樣閥中殘留的樣品； 每天分析測定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗?nbsp;若分析柱長期不使用，應(yīng)用適當(dāng)有機溶劑保存并封閉；